犬猫交叉配血试验操作规范

犬猫交叉配血试验操作规范.pdf本文件为T/CVMA 66-2021《犬猫交叉配血试验操作规范》，由中国兽医协会发布并于2021年12月22日实施，明确了犬猫交叉配血试验的适用范围、术语定义，规定了试验所需样本、材料和设备，详细阐述了主侧、副侧交叉配血试验及阴性对照的操作步骤，制定了以溶血、凝集为核心的结果判定标准，同时附红细胞悬浮液（2%~4%）和血清的规范性制备方法，是犬猫输血前确定血液是否匹配的重要操作依据。

思维导图

## 规范基础信息
- 标准编号：T/CVMA 66-2021
- 发布/实施时间：2021.12.22
- 归口单位：中国兽医协会
- 起草/提出单位：中农大动物医院等多家机构
- 适用范围：犬猫交叉配血试验操作及结果判定
## 核心术语定义
- 交叉配血试验：检测供血/受血动物血液抗原-抗体，判断输血匹配性
## 样本、材料和设备
- 材料设备：EDTA抗凝血、新鲜非抗凝全血、低速离心机等
- 试验样本：2%~4%红细胞悬浮液、新鲜分离血清
## 试验操作方法
- 主侧交叉配血：供血红细胞+受血血清，37℃孵育20min，可4℃平行操作
- 副侧交叉配血：受血红细胞+供血血清，操作同主侧
- 阴性对照：供血/受血自身红细胞+血清，操作同主侧
## 结果判定
- 溶血：上清呈淡粉色至红色
- 凝集：红细胞葡萄串样杂乱堆叠
- 判定标准：阴性对照为前提，分相配、不相配、操作无效、结果不可靠四种情况
## 附录规范方法
- 红细胞悬浮液：EDTA抗凝血经3次生理盐水洗涤，配制成2%~4%悬液
- 血清制备：新鲜非抗凝全血室温静置后1000g离心5~10min分离

详细总结

本文件为中国兽医协会发布的T/CVMA 66-2021《犬猫交叉配血试验操作规范》，2021年12月22日同步发布并实施，是犬猫交叉配血试验的标准化操作依据，整体内容分为基础规范、操作执行、结果判定、附录方法四大模块，核心信息如下：

1. 基础规范要求

   • 制定依据：按GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分》起草，无其他规范性引用文件。
   • 核心术语：交叉配血试验指通过检测供血、受血动物血液的抗原-抗体成分，判断血液匹配性，是犬猫输血的重要依据。
   • 适用范围：仅适用于犬猫的交叉配血试验操作及结果判定。

2. 样本、材料和设备

   类别	具体内容
   核心材料和设备	EDTA抗凝血、新鲜非抗凝全血、吸管、生理盐水、离心管、低速离心机、37℃恒温箱、计时器、载玻片、盖玻片
   试验专用样本	2%~4%红细胞悬浮液（由EDTA抗凝血制备）、新鲜血清（由新鲜非抗凝全血分离）

3. 试验操作方法
   试验核心分为主侧交叉配血、副侧交叉配血和阴性对照三部分，均需遵循统一的孵育、观察流程，关键操作参数一致：

   • 主侧交叉配血试验：1滴供血动物红细胞悬浮液+2滴受血动物血清混匀，37℃恒温箱孵育20min（可另制样本4℃平行孵育）；观察上清颜色，受干扰则450g离心15s后再观察；取混合液镜检红细胞状态。
   • 副侧交叉配血试验：操作与主侧一致，仅样本配比为1滴受血动物红细胞悬浮液+2滴供血动物血清。
   • 阴性对照：分供血、受血动物自身对照，分别为1滴自身红细胞悬浮液+2滴自身血清混匀，后续孵育、观察、离心、镜检操作与主侧完全相同。

4. 结果判定标准
   判定核心为溶血和凝集两种现象，且需以阴性对照结果为前提，具体判定规则如下：

   • 溶血判定：观察到上清呈淡粉色至红色，即为发生溶血。
   • 凝集判定：显微镜下红细胞呈葡萄串样、杂乱无序堆叠（非钱串样规则堆叠），即为发生凝集。

   • 综合判定依据：供血动物需为临床健康动物，分四种结果（见下表）

     前提条件	试验结果	判定结论
     阴性对照无溶血/凝集	试验侧无溶血、无凝集	该侧相配
     阴性对照无溶血/凝集	试验侧发生溶血或凝集	该侧不相配
     供血动物阴性对照有溶血/凝集	—	操作无效，不可判定
     供血动物阴性对照无溶血/凝集，受血动物阴性对照有溶血/凝集	—	操作有效，结果不可靠

5. 附录规范性制备方法
   含两个规范性附录，分别为红细胞悬浮液和血清的制备方法，明确了操作步骤、参数和注意事项：

   • 附录A：2%~4%红细胞悬浮液制备

     1. 取0.2mL EDTA抗凝血，加5mL生理盐水轻柔混匀，450g离心3~5min后弃上清；
     2. 重复洗涤操作3次；
     3. 取30μL浓缩红细胞加入1mL生理盐水混匀，制成悬液；
     4. 注意：轻柔操作，避免吹打，弃上清不倾倒。

   • 附录B：血清制备

     1. 新鲜非抗凝全血室温静置30min（或至血液凝固、有液体析出）；
     2. 1000g离心5~10min，吸取上清为血清；
     3. 注意：室温过低可延长静置时间，避免触及血凝块、吸取纤维蛋白。

关键问题

1. 犬猫交叉配血试验中主侧和副侧配血的样本配比及核心区别是什么？
   答案：主侧、副侧配血的样本滴数配比均为1滴红细胞悬浮液+2滴血清；核心区别为样本来源，主侧是供血动物红细胞悬浮液+受血动物血清，副侧是受血动物红细胞悬浮液+供血动物血清，二者从不同角度检测血液抗原-抗体的匹配性。
2. 犬猫交叉配血试验结果判定的核心前提和关键观察指标分别是什么？
   答案：结果判定的核心前提是供血动物为临床健康动物且需参考阴性对照的结果；关键观察指标为溶血（上清淡粉色至红色）和凝集（红细胞葡萄串样杂乱堆叠），二者出现其一即判定为试验侧不相配。
3. 制备犬猫交叉配血试验用的2%~4%红细胞悬浮液时，关键的离心参数和洗涤要求是什么？
   答案：洗涤时的离心参数为450g离心3~5min，需用生理盐水对EDTA抗凝血进行3次重复洗涤；制备完成前需取30μL浓缩红细胞与1mL生理盐水混匀，全程操作需轻柔，避免吹打红细胞。